Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator mutations at a referral center for cystic fibrosis.

OBJECTIVE: To determine the frequency of six mutations (F508del, G542X, G551D, R553X, R1162X, and N1303K) in patients with cystic fibrosis (CF) diagnosed, at a referral center, on the basis of abnormal results in two determinations of sweat sodium and chloride concentrations.
METHODS: This was a cross-sectional study involving 70 patients with CF. The mean age of the patients was 12.38 ± 9.00 years, 51.43% were female, and 94.29% were White. Mutation screening was performed with polymerase chain reaction (for F508del), followed by enzymatic digestion (for other mutations). Clinical analysis was performed on the basis of gender, age, ethnicity, pulmonary/gastrointestinal symptoms, and Shwachman-Kulczycki (SK) score.
RESULTS: All of the patients showed pulmonary symptoms, and 8 had no gastrointestinal symptoms. On the basis of the SK scores, CF was determined to be mild, moderate, and severe in 22 (42.3%), 17 (32.7%), and 13 (25.0%) of the patients, respectively. There was no association between F508del mutation and disease severity by SK score. Of the 140 alleles analyzed, F508del mutation was identified in 70 (50%). Other mutations (G542X, G551D, R553X, R1162X, and N1303K) were identified in 12 (7.93%) of the alleles studied. In F508del homozygous patients with severe disease, the OR was 0.124 (95% CI: 0.005-0.826).
CONCLUSIONS: In 50% of the alleles studied, the molecular diagnosis of CF was confirmed by identifying a single mutation (F508del). If we consider the analysis of the six most common mutations in the Brazilian population (including F508del), the molecular diagnosis was confirmed in 58.57% of the alleles studied.

Introduction

Cystic fibrosis (CF; #219700) is an autosomal recessive monogenic disorder caused by mutations in the cystic fibrosis transmembrane regulator (CFTR; #602421) gene in region 7q3.1.( ) Since the CFTR gene was identified, approximately 2,000 mutations have been identified in it.

Currently, the diagnosis of CF is based on the finding of abnormal sweat sodium and chloride concentrations; however, other diagnostic tools have been studied, such as: (a) determination of salivary sodium and chloride concentrations( ); induction of chloride secretion in response to β-adrenergic stimulation of sweat( ); (c) CFTR-mediated chloride secretion in rectal biopsies( ); (d) neonatal screening by immunoreactive trypsin( ); (e) measurement of nasal potential difference( ); and (f) next-generation sequencing of or identification of two mutations in the CFTR gene following (or not) neonatal screening.( - )

The severity of CF depends on and is modulated by environmental factors, modifier genes, and classes of mutations in the CFTR gene.( - ) Mutations in the CFTR gene are divided into six classes associated with disease severity.( , ) Class I, II, and III mutations result in greater severity than do class IV, V, and VI mutations.

A study of all mutations in the CFTR gene is not possible in Brazil and in many countries. In this context, the present study sought to identify the most common mutations in the CFTR gene at a referral center. All patients were screened for the most common mutations in CF-F508del (c.1521_1523delCTT; p.Phe508del; class II); G542X (c.1624G>T; p.Gly542X; class I); G551D (c.1652G>A; p.Gly551Asp; class III); R553X (c.1657C>T; p.Arg553X; class I); R1162X (c.3484C>T; p.Arg1162X; class I); and N1303K (c.3909C>T; p.Asn1303Lys; class II)-and the results were compared with patient clinical and demographic characteristics.

Methods

This was a cross-sectional study involving 70 patients with CF diagnosed on the basis of two sweat chloride test results of 60 mEq/L or greater.

The study was approved by the local research ethics committee (Protocol no. 297/2003). All patients, or parents/legal guardians of patients who were minors, gave written informed consent before the beginning of the study.

Extraction of DNA was performed using the lithium chloride technique. The DNA concentration used for the analysis was 50 ng/mL, evaluated in a spectrophotometer (GE NanoVueTM; GE Healthcare Biosciences, Pittsburgh, PA, USA).

The procedure used for identification of mutations in the CFTR gene, including primers, fragment sizes, restriction enzymes (in accordance with the manufacturer's guidelines), and the fragment that represents the presence of the mutation, is described in Tables 1 and 2.

Table 1

Reagent concentrations and programs used in polymerase chain reaction for identification of mutations in the cystic fibrosis transmembrane regulator gene in patients with cystic fibrosis.

Table 2

Sequence of primers and digestive enzymes used in polymerase chain reaction and in enzymatic digestion for identification of mutations in the cystic fibrosis transmembrane regulator gene in patients with cystic fibrosis.

The technique used for identification of the mutations analyzed (G542X, G551D, R553X, R1162X, and N1303K) was enzymatic digestion, except for mutation F508del, which is the deletion of three base pairs on exon 10. On exon 11 (G542X, G551D, and R553X), when the presence of mutations is detected, a second enzymatic digestion is performed to differentiate mutations G551D and R553X.

The clinical characteristics of the patients were investigated by two of the authors of the study, who were qualified to perform the analysis. The following data were used for the study: gender (male/female); age (< 10 years, 11-20 years, and > 21 years); ethnicity (White and non-White); clinical symptoms of pulmonary involvement (as determined by culture of respiratory tract secretions, spirometry, and transcutaneous oxygen saturation measurements); gastrointestinal symptoms (as determined by fecal fat balance studies and fecal elastase measurements); and Shwachman-Kulczycki (SK) score.

The SK score assesses nutrition, general activity, physical examination, and radiographic changes. For each item evaluated, the maximum score is 25 points. Lower scores translate to poorer clinical status. The total score is graded as very mild (86-100), mild (71-85), moderate (56-70), severe (41-55), and extremely severe (40 or less).( ) In our study, we defined mild disease as an SK score of 71 to 100, moderate disease as an SK score of 56 to 70, and severe disease an SK score of 55 or less. The scores were categorized this way in order to obtain a smaller number of groups to allow the statistical analysis of the data.

The statistical analysis was performed with the IBM SPSS Statistics software package, version 21.0 (IBM Corporation, Armonk, NY, USA).

Mutations, as well as categorical clinical and demographic data (gender, ethnicity, and presence of pulmonary/gastrointestinal symptoms), were expressed as absolute and percentage values. Age was expressed as mean and standard deviation.

In order to compare clinical severity in terms of identification of the CFTR gene mutations included in this study, the chi-square test and Fisher's exact test, including calculation of OR, were used for comparisons between presence of mutations and patient clinical and demographic characteristics.

Results

The mean age of the participants was 12.38 ± 9.00 years (range, 2-49 years). Patient distribution by age group was as follows: < 10 years, 57.14%; 11-20 years, 27.14%; and > 21 years, 15.72%.

There were 36 female patients (51.43%). The distribution by gender was uniform.

Most patients were of White origin (94.29%). All patients had respiratory symptoms, and only 8 (11.43%), of whom 2 were compound heterozygous for mutation F508del and 6 did not have this mutation (OR = 0.111; 95% CI: 0.014-0.581), had no gastrointestinal symptoms (Table 3).

Table 3

Association between the genotype of the cystic fibrosis transmembrane regulator gene for mutation F508del and gastrointestinal symptoms.

The genotypes and allele frequency for the mutations identified are described in Table 4. In the 52 patients with genotypes containing at least one of the mutations studied, 22 (42.3%), 17 (32.7%), and 13 (25.0%), respectively, were classified as having mild, moderate, and severe disease on the basis of the SK scores. There was no association between mutation F508del and disease severity as measured by SK score; only F508del homozygous patients showed an OR of 0.124 (95% CI: 0.005-0.826) for the severe form (Table 5).

Table 4

Description of the mutations in the cystic fibrosis transmembrane regulator gene identified in the patients with cystic fibrosis.a

Table 5

Association between the genotype of the cystic fibrosis transmembrane regulator gene for the F508del mutation and disease severity by Shwachman-Kulczycki score.

Values expressed as n (%).

Mutation F508del was identified in 70 (50%) of the 140 alleles analyzed. The genotype frequency analysis showed that homozygosity for mutation F508del occurred in 30% of the patients.

Discussion

The values of the age distribution of the patients in our study were similar to those of Maróstica et al.( ) In 61 patients, ages ranged from 4 months to 17 years, and 73.77% of those patients were under 10 years of age. This distribution should reflect the presence of class I-III mutations, which are more frequently identified in pediatric CF centers than in adult CF centers, where there is a higher prevalence of class IV-VI mutations.

Since CF is an autosomal recessive genetic disease, it is expected that there be a balance in prevalence between genders, as was observed by us. Some authors have described a slight male predominance, a finding reported by Streit et al.(20) and Maróstica et al.,( ) respectively, with values of 61% and 62.3% for the male gender. One hypothesis is the greater deterioration in lung function observed in girls during puberty.

The prevalence of Whites is in agreement with the literature, which shows a low incidence of CF among non-Whites. In Brazil, studies conducted in the state of Rio Grande do Sul (predominantly White)( ) and in the state of Bahia (predominantly Black)( ) reported 100% and 28.7% of Whites with CF, respectively, showing that the prevalence of CF might be associated with ethnic characteristics.

Although the molecular diagnosis of CF is complex because of the molecular heterogeneity of the CFTR gene, a point analysis of some mutations is necessary. A study involving screening for mutation F508del as a first step for molecular identification of mutations in the CFTR gene was performed by our group.( ) Mutation F508del was identified in 70 (50%) of the 140 alleles analyzed. The high prevalence of mutation F508del can also be observed in studies conducted in the Brazilian states of Rio Grande do Sul,(20) São Paulo,( , ) Rio de Janeiro,(24) and Pará,( ) in which, respectively, the analysis of 154, 116, 148, 108, and 66 alleles showed a frequency of 48.7% (χ2 = 0.05; p = 0.82), 47% (χ2 = 0.17; p = 0.68), 44.45% (χ2 = 0.75; p = 0.38), 25.68% (χ2 = 18.16; p < 0.01), and 22.7% (χ2 = 13.77; p = 0.01). It is of note that all of those studies were conducted in Brazil.

The higher prevalence rates of homozygosity and heterozygosity for mutation F508del as compared with those observed in other Brazilian states underscores the importance of screening for mutation F508del in Brazil.( ) Whereas in our study the genotype frequency analysis showed that homozygosity for mutation F508del occurred in 30% of the patients, in the studies conducted in Rio Grande do Sul,( ) São Paulo,( ) and Rio de Janeiro,( ) homozygosity for this mutation occurred in 31.2%, 21.3%, and 10.81% of the patients, respectively. In contrast, in our study, heterozygosity occurred in 57.14%, which is a higher value than those found in the same aforementioned studies (28.6%, 46.3%, and 22.97%, respectively).( , , )

The prevalence of mutation G542X was 4.29% in our study, a value that is similar to those found in other studies conducted in Brazil-3.2% (χ2= 6.22; p = 0.63),( ) 2.7% (χ2= 0.54; p = 0.46),(24) and 5.5 (χ2 = 11.91; p < 0.01).( ) Mutation R553X was identified in 0.71% of the alleles analyzed. In the studies by Streit et al.( ) and Raskin et al.,( ) the frequency of mutation R553X was 0.7% (χ2 = 0.01; p = 0.93) and 0.8% (χ2 = 4.31; p = 0.037), respectively. Mutation R1162X was detected in 2.4% of the alleles. Although class I mutations (G542X, R553X, and R1162X) are of low prevalence in Brazil (being identified in less than 6% of the alleles studied), it is of note that studies in animal models and humans have been promising for new drugs to correct CFTR function for these mutations, among which is PTC124.( )

Unlike mutation F508del, which is also a class II mutation and was highly prevalent, mutation N1303K was of low prevalence (being identified in 1.43% of the alleles analyzed). Other studies conducted in Brazil did not analyze this mutation.( , ) For this class of mutation, drugs to correct and potentiate CFTR function, such as VX-770 and VX-809, have been studied.( , )

Mutation G551D was not detected in the sample evaluated, being only identified by Raskin et al.( ) in one allele analyzed (1.8%; χ2 = 2.51; p = 0.11). For this mutation, VX-770, a drug known as kalydeco (Vertex(r)), is available on the market.( )

In our sample of 70 patients with CF, 8 patients had no gastrointestinal symptoms. Of those, none were homozygous for F508del, and, in 5, none of the mutations studied were identified.

Although it is known that there is a relationship between mutation F508del and disease severity, in the association of this mutation with the SK scores, 1.92% of the individuals who were homozygous for mutation F508del had severe disease, whereas 23.08% of the individuals with two undiagnosed mutations had severe disease as measured by SK score. Some hypotheses can be formulated to explain the lower frequency of severe disease as measured by SK score in F508del homozygous patients, such as gene modulation,( - ) a higher early mortality rate in these patients, and low adherence to disease management or treatment.

In conclusion, the analysis of the six mutations in the CFTR gene enabled the confirmation of the molecular diagnosis of CF in 58.57% of the 140 alleles analyzed. However, 50% of the total number of alleles analyzed carried mutation F508del, and screening for this mutation should be the first step for identification of mutations in the CFTR gene, on the basis of the recent implementation of the neonatal screening test in our state. The presence of SK scores indicating mild disease in most patients, even in those who were homozygous for class II mutations, could be due to the low age of the patients, who still do not exhibit the clinical severity associated with disease progression, as well as to low adherence to treatment among the patients with greater disease severity.

Introdução

A fibrose cística (FC; #219700) é uma doença autossômica, monogênica e recessiva, causada por mutações no gene cystic fibrosis transmembrane regulator (CFTR; #602421) na região 7q3.1.(1) Desde a identificação do gene CFTR, aproximadamente 2.000 mutações foram identificadas no mesmo.

Atualmente, o diagnóstico da FC é baseado em valores alterados de sódio e cloro no suor; contudo, outras ferramentas de diagnóstico têm sido estudadas, tais como: (a) mensuração dos valores de cloro e sódio na saliva( ); (b) indução da secreção de cloro por estímulo β-adrenérgico no suor( ); (c) medidas da secreção de cloro pelo CFTR em biópsias retais( ); (d) triagem neonatal por tripsina imunorreativa( ); (e) diferença de potencial nasal( ); e (f) sequenciamento de nova geração e/ou determinação de duas mutações no gene CFTR, em seguimento ou não, da triagem neonatal.(7-9)

A gravidade da FC é dependente e modulada por fatores ambientais, genes modificadores e classes das mutações no gene CFTR.( - ) As mutações no gene CFTR são divididas em seis classes associadas à gravidade da doença.( , ) Mutações de classe I, II e III acarretam maior gravidade do que as de IV, V e VI.

O estudo de todas as mutações no gene CFTR não é possível na realidade brasileira e em muitos países. Nesse contexto, o presente estudo buscou a identificação das mutações de maior frequência no gene CFTR em um centro de referência. Todos os pacientes foram investigados para as mutações de maior frequência da FC - F508del (c.1521_1523delCTT; p.Phe508del; classe II); G542X (c.1624G>T; p.Gly542X; classe I); G551D (c.1652G>A; p.Gly551Asp; classe III); R553X (c.1657C>T; p.Arg553X; classe I); R1162X (c.3484C>T; p.Arg1162X; classe I); e N1303K (c.3909C>T; p.Asn1303Lys; classe II) - e os resultados foram comparados com variáveis clínico-demográficas dos pacientes.

Métodos

Estudo de corte transversal. Foram incluídos 70 pacientes com FC diagnosticada por dois valores de cloro iguais ou superiores a 60 mEq/L no teste do suor.

O estudo foi aprovado pelo comitê de ética em pesquisa da instituição (Protocolo #297/2003). Todos os pacientes assinaram o termo de consentimento livre e esclarecido antes do início do estudo, e no caso de o paciente ser menor de idade, o termo foi assinado pelos pais ou responsáveis legais.

A extração de DNA foi realizada pela técnica do cloreto de lítio. A concentração de DNA utilizada para a análise foi de 50 ng/mL, avaliada em um espectrofotômetro (GE NanoVueTM; GE Healthcare Biosciences, Pittsburgh, PA, EUA).

Para a identificação das mutações no gene CFTR, o procedimento utilizado está descrito nas Tabelas 1 e 2, incluindo os iniciadores, tamanhos dos fragmentos, enzimas de restrição (segundo recomendações do fabricante) e o fragmento que representa a presença da mutação.

Tabela 1

Concentração dos reagentes e programas utilizados na reação de cadeia da polimerase para a identificação das mutações no gene cystic fibrosis transmembrane regulator em pacientes com fibrose cística.

Tabela 2

Sequências de iniciadores e enzimas de digestão utilizadas na reação de cadeia da polimerase e na digestão enzimática para a identificação das mutações no gene cystic fibrosis transmembrane regulator em pacientes com fibrose cística.

A técnica utilizada para a identificação das mutações analisadas (G542X, G551D, R553X, R1162X e N1303K) foi a digestão enzimática, exceto para a F508del, que é a deleção de três pares de base no éxon 10. No éxon 11 (G542X, G551D e R553X), quando detectada a presença de mutações, uma segunda digestão enzimática foi realizada para diferenciar as mutações G551D e R553X.

A caracterização clínica dos pacientes foi realizada por dois pesquisadores do estudo, devidamente capacitados para a análise. As variáveis utilizadas no estudo foram: sexo (masculino/feminino), idade (< 10, 11-20 e > 21 anos), etnia (caucasoides e não caucasoides), manifestações clínicas de comprometimento pulmonar (determinada por cultura de secreções do trato respiratório, espirometria e mensuração da saturação de oxigênio transcutânea), manifestações digestivas (balanço de gordura nas fezes e avaliação da elastase fecal) e escore de Shwachman-Kulczycki (ESK).

O ESK avalia a nutrição, atividade geral, exame físico e alterações radiográficas. Cada item avaliado foi pontuado para atingir o máximo de 25 pontos. Quanto menor a pontuação, pior o quadro clínico. O escore é graduado em excelente (86-100), bom (71-85), médio (56-70), moderado (41-55) e grave (40 ou menos), conforme o número total de pontos.(18) Definiu-se como doença de grau leve o escore do ESK excelente e bom; de grau moderado, o escore médio; e de grau grave, os escores moderado e grave. A categorização dos escores foi realizada para se obter um número menor de grupos para permitir a análise estatística dos dados.

A análise estatística foi realizada pelo programa IBM SPSS Statistics, versão 21.0 para Windows (IBM Corp., Armonk, NY, EUA).

Para as mutações e descrição das variáveis clínico-demográficas categóricas (sexo, etnia e presença de manifestação pulmonar/digestiva) foi utilizado o valor absoluto e percentual. Para a idade, foi utilizado à média e o desvio-padrão.

A comparação da presença das mutações com as variáveis clínico-demográficas dos pacientes foi realizada pelos testes do qui-quadrado e exato de Fisher, com o cálculo de OR, com o intuito de comparar a gravidade clínica em relação à identificação das mutações no gene CFTR incluídas no estudo.

Resultados

Os pacientes incluídos tiveram uma média de idade de 12,38 ± 9.00 anos (variação, 2-49 anos). A distribuição dos pacientes segundo as faixas etárias em estudo foram de 57,14%, 27,14% e 15,72%, respectivamente, nas faixas < 10 anos, 11-20 anos e > 21 anos.

Foram incluídos 36 pacientes do sexo feminino (51,43%). Houve distribuição uniforme em relação ao sexo.

A origem caucasoide foi observada em 94,29% dos pacientes. Todos os pacientes apresentaram manifestação respiratória, e apenas 8 (11,43%), sendo 2 deles heterozigotos compostos para a F508del e os demais sem a mutação (OR = 0,111; IC95%: 0,014-0,581), não apresentaram manifestação digestiva (Tabela 3).

Tabela 3

Associação do genótipo do gene cystic fibrosis transmembrane regulator para a mutação F508del com manifestações digestivas.

A descrição dos genótipos e da frequência alélica para as mutações identificadas está apresentada na Tabela 4. Nos 52 pacientes com genótipos que continham ao menos uma das mutações estudadas, 22 (42,3%), 17 (32,7%) e 13 (25,0%), respectivamente, foram classificados como tendo doença leve, moderada e grave segundo os resultados do ESK. Não houve associação da mutação F508del com a gravidade segundo o ESK; apenas pacientes homozigotos F508del apresentaram OR de 0,124 (IC95%: 0,005-0,826) para a forma grave (Tabela 5).

Tabela 4

Descrição das mutações no gene cystic fibrosis transmembrane regulator identificadas nos pacientes com fibrose cística.a

Tabela 5

Associação do genótipo do gene cystic fibrosis transmembrane regulator para a mutação F508del com grau da doença segundo o escore de Shwachman-Kulczycki.

Dos 140 alelos analisados, a mutação F508del foi identificada em 70 (50%). Para a frequência genotípica, a mutação F508del em homozigose ocorreu em 30% dos pacientes.

Discussão

Os valores de distribuição das idades dos pacientes em nosso estudo foram semelhantes aos de Maróstica et al.,( ) sendo que, em 61 pacientes, a idade variou de quatro meses a 17 anos, e 73,77% dos pacientes eram menores de 10 anos. Essa distribuição deve refletir a presença de mutações das classes I-III, mais frequentemente identificadas nos centros pediátricos de FC em detrimento de maior prevalência de mutações das classes IV-VI nos centros de FC de adultos.

Como a FC é uma doença genética autossômica recessiva, é de se esperar um equilíbrio na prevalência entre os sexos, como foi por nós observado. Alguns autores têm descrito um discreto predomínio do sexo masculino, fato relatado por Streit et al.(20) e Maróstica et al.,( ) respectivamente, com valores de 61% e 62,3% para o sexo masculino. Uma hipótese é a maior deterioração da função pulmonar observada nas meninas durante a puberdade.

A prevalência de caucasoides está de acordo com os dados da literatura, que demonstram uma baixa incidência de FC entre não caucasoides. No Brasil, estudos realizados no estado do Rio Grande do Sul (predominantemente caucasoide)( ) e no estado da Bahia (predominantemente negroide)( ) evidenciaram, respectivamente, 100% e 28,7% de caucasóides com FC, demonstrando que a prevalência de FC pode estar associada com características étnicas.

Embora o diagnóstico molecular da FC seja complexo devido à heterogeneidade molecular do gene CFTR, a análise pontual de algumas mutações é necessária. Um estudo envolvendo a mutação F508del como primeiro passo para a identificação molecular de mutações no gene CFTR foi realizado por nosso grupo.(7) Dos 140 alelos analisados, a mutação F508del foi identificada em 70 (50%). A elevada prevalência da F508del pode ser observada também em estudos realizados no Rio Grande do Sul,(20) São Paulo,( , ) Rio de Janeiro,(24) e Pará,( ) nos quais, respectivamente, a análise de 154, 116, 148, 108 e 66 alelos, mostrou a frequência de 48,7% (χ2 = 0,05; p = 0,82), 47% (χ2 = 0,17; p = 0,68), 44,45% (χ2 = 0,75; p = 0,38), 25,68% (χ2 = 18,16; p < 0,01) e 22,7% (χ2 = 13,77; p = 0,01). Vale ressaltar que todos esses estudos são brasileiros.

As maiores prevalências de homozigoze e heterozigoze para a mutação F508del, comparadas aos resultados em outros estados do Brasil, reforça, em nosso meio, a importância da triagem da mutação F508del.( ) Enquanto, em nosso estudo, a frequência genotípica para a mutação F508del em homozigoze ocorreu em 30% dos pacientes, no Rio Grande do Sul,( ) São Paulo( ) e Rio de Janeiro( ) e essa ocorreu, respectivamente, em 31,2%, 21,3% e 10,81% dos pacientes. Por outro lado, em nosso estudo, a heterozigose ocorreu em 40,01%, que é um valor mais próximo do que os encontrados nos mesmos estudos acima citados (28,6%, 46,3% e 22,97%, respectivamente).( , , )

A prevalência da mutação G542X foi de 4,29% em nosso estudo, valor semelhante aos encontrados em outros estudos no Brasil, de 3,2% (χ2= 6,22; p = 0,63),( ) 2,7% (χ2= 0,54; p = 0,46)(24) e 5,5 (χ2 = 11,91; p < 0,01).( ) A mutação R553X foi identificada em 0,71% dos alelos analisados. Nos estudos de Streit et al.( ) e Raskin et al.,( ) houve frequência de 0,7% (χ2 = 0,01; p = 0,93) e 0,8% (χ2 = 4,31; p = 0,037), respectivamente. A mutação R1162X foi detectada em 2,4% dos alelos. Embora as mutações de classe I (G542X, R553X e R1162X) tenham baixa prevalência no Brasil (menos que 6% dos alelos pesquisados), vale ressaltar que estudos em modelos animais e humanos têm sido promissores para novas drogas corretoras da função da CFTR para essas mutações, entre elas, PTC124.( )

Ao contrário da mutação F508del, também de classe II, com alta prevalência, a N1303K apresentou baixa prevalência (1,43% dos alelos analisados). Outros estudos brasileiros não analisaram essa mutação.( , ) Para essa classe de mutação, drogas corretoras e potenciadoras da função da CFTR têm sido pesquisadas, tais como VX-770 e VX-809.( , )

A mutação G551D não foi detectada na amostra avaliada, sendo apenas identificada por Raskin et al.( ) em um alelo analisado (1,8%; χ2 = 2,51; p = 0,11). Para essa mutação, está disponível no mercado a droga VX-770, conhecida como kalydeco (Vertex(r)).( )

Em nossa casuística de 70 pacientes com FC, 8 pacientes não apresentaram alteração digestiva. Desses, nenhum era homozigoto F508del e, em 5, não foi detectada nenhuma das mutações estudadas.

Embora a relação da mutação F508del e a gravidade da doença seja conhecida na associação entre essa mutação e resultados do ESK, 1,92% dos indivíduos homozigotos para a mutação F508del apresentava doença grave, enquanto, naqueles com duas mutações não diagnosticadas, 23,08% dos indivíduos apresentava doença grave segundo o ESK. Algumas hipóteses podem ser formuladas para a menor frequência de doença grave pelo ESK em pacientes homozigotos F508del, tais como a modulação gênica,( - ) a maior mortalidade precoce desses pacientes e a baixa adesão ao manejo ou ao tratamento da doença.

Concluímos que a análise das seis mutações do gene CFTR permitiu a identificação de 58,57% dos 140 alelos. Contudo, do total analisado, 50% dos alelos eram da mutação F508del, que deve ser o padrão inicial para a identificação de mutações no gene CFTR, tendo como base a recente implantação do teste de triagem neonatal em nosso estado. A presença de resultados ESK indicando doença leve para a maioria dos pacientes, mesmo naqueles com mutações de classe II em forma homozigota, pode traduzir a baixa idade dos pacientes que ainda não apresentam gravidade clínica associada à progressão da doença, bem como a baixa adesão dos pacientes de maior gravidade ao tratamento da doença.