[Detection of Leptospire spp. in animals and in environmental samples from peridomestic areas in NicaraguaDetecção de Leptospira spp. em animais e em amostras ambientais de áreas peridomiciliares na Nicarágua].

OBJECTIVE: The objective of this study was to determine the epidemiological characteristics of leptospirosis in pets and in humans in peridomestic settings in Nicaragua between 2014 and 2016.
METHODS: The samples were taken in areas where cases were confirmed in humans using non-probabilistic sampling in 10 of the country's 17 departments. This included 112 urine samples from pets, 129 water samples, and 69 soil samples in order to isolate leptospires in Ellinghausen-McCullough-Johnson-Harris (EMJH) medium. Furthermore, the microscopic agglutination test (MAT) was applied to 263 samples of animal serum, and 88 isolates were analyzed using PCR.
RESULTS: In 32.6% (101/310) of the samples, spirochetes were isolated: 23.2% (26/112) in the pet urine, 47.3% (61/129) in water samples, and 20.3% (14/69) in soil samples. Isolation analysis showed significant differences (p<0.05) between departments for the different types of samples, and isolation was more frequent in water than in soil (OR = 3.49; CI95%: 1.56-7.80). In total, 14.1% (37/263) of the animals were reactors in the microscopic agglutination test. The most frequent serogroup was Icterohaemorrhagiae (40%). PCR analysis to identify pathogenic species of leptospires resulted in 10.2% (9/88) positive isolations.
CONCLUSIONS: This research demonstrates that pets and environment conditions play an important role in the emergence of outbreaks of leptospirosis, and confirms the endemic behavior of the disease in Nicaragua.

En Nicaragua, la leptospirosis se conoció como fiebre de Achuapa en 1995 (1). En octubre de ese año, en el municipio de Achuapa se observó un aumento del número de pacientes con fiebre, dolor de cabeza, escalofríos y dolor musculoesquelético; tres fallecieron. En las semanas siguientes se declararon 400 casos en Achuapa y El Sauce, de los cuales 150 fueron hospitalizados con un cuadro más grave (dolor abdominal, hipotensión y distrés respiratorio). Al menos 13 de ellos murieron por distrés respiratorio y hemorragia pulmonar. No se observaron ictericia ni manifestaciones renales (2). Se afirmó que las principales características del ecosistema que favorecieron la transmisión de la bacteria fueron las lluvias abundantes con desbordamientos de los ríos y las aguas residuales contaminadas con orina de animales infectados (3, 4).

Algunos estudios revelan una alta incidencia de leptospirosis humana en Nicaragua (4, 5). Las incidencias acumuladas por municipios oscilan entre 0 y 11,36 por 10 000 habitantes. Los departamentos con mayor incidencia acumulada son León y Chinandega con 36,03 y 18,84 por 10 000 habitantes, respectivamente (4). Actualmente se conoce mejor el comportamiento de la enfermedad debido a que en los últimos años se ha mejorado el sistema de vigilancia epidemiológica. Además, se ha desplegado un plan de trabajo interinstitucional de abordaje integral para la prevención y el control de la leptospirosis en los municipios priorizados por los Sistemas Locales de Atención Integral en Salud (SILAIS)”, mediante el cual se realiza el control de focos. En dicho plan participan el Ministerio de Salud (MINSA), el Instituto de Protección y Sanidad Animal (IPSA), la Escuela de Ciencias Agrarias y Veterinarias de la Universidad Nacional Autónoma de Nicaragua, León (UNAN-León), y la Representación de la Organización Panamericana de Salud (OPS) en Nicaragua (6). El objetivo de este estudio fue conocer las características epidemiológicas de la leptospirosis en animales domésticos y en los casos de leptospirosis humana en áreas peridomésticas en Nicaragua entre 2014 y 2016.

MATERIALES Y MÉTODOS

El área del estudio fue Nicaragua, un país centroamericano con clima tropical (se localiza 10° 45´ y 15° 15´ de latitud norte y 83° 00´ y 88° 00´ longitud oeste) (7). El estudio se realizó en 10 de los 17 departamentos del país. En las zonas Central y Norte se incluyeron los departamentos de Boaco, Jinotega, Madriz, Matagalpa y Nueva Segovia. Esta zona se caracteriza por su topografía montañosa, con precipitaciones anuales entre 800 y 2 500 mm y temperaturas cercanas a los 26 °C. En la zona del Pacífico se obtuvieron muestras en los departamentos de Chinandega, León, Rivas, Managua y Masaya. Esta es la región volcánica y lacustre del país, con precipitaciones anuales que oscilan entre 1 000 y 2 000 mm y una temperatura media cercana a los 34 °C (8).

Las muestras se extrajeron mediante un muestreo no probabilístico de animales de ambos sexos, en áreas urbanas, 30 m alrededor de la vivienda de pacientes con leptospirosis humana y 100 m en áreas rurales. Los casos en humanos fueron confirmados por el MINSA con la prueba de aglutinación microscópica (MAT) en muestras apareadas. En viviendas con varios animales de la misma especie, se muestreó al menos un animal por especie mediante muestreo aleatorio simple. Las muestras de orina se recolectaron por estimulación de la micción en bovinos y equinos, mientras que en caninos, porcinos y felinos se obtuvieron por punción de la vejiga. Se recolectaron 263 muestras de sangre: 159 en caninos, 36 en bovinos, 60 en porcinos, 7 en equinos y 1 en un felino. Para el aislamiento a partir de la orina, se recolectaron 112 muestras, 75 en caninos, 22 en porcinos y 15 en bovinos.

Se extrajeron, asimismo, 129 muestras de agua de diferentes fuentes, como la almacenada en pozos, ríos, charcas y en la red de distribución pública, todas ellas cercanas o dentro de las viviendas de los pacientes con leptospirosis humana. En los ríos se obtuvieron muestras de áreas protegidas de los rayos solares y con menor flujo. Se recolectó 1L en frascos estériles y las muestras se transportaron a 4 °C al laboratorio de leptospirosis en el Centro Veterinario de Diagnóstico e Investigación (CEVEDI).

También se obtuvieron 69 muestras de tierra, recolectando 10 g por muestra en un frasco estéril en áreas húmedas cercanas al lugar de permanencia de los animales, en la cocina y en lugares de almacenamiento de los alimentos.

Para realizar los aislamientos en las muestras seleccionadas, se utilizó la guía descrita por la Organización Mundial de la Salud (OMS) (9). Para el aislamiento a partir de las muestras de tierra, se pesaron 5 g de cada muestra, que se suspendieron en 10 ml de agua destilada estéril manteniendo los tubos en posición vertical durante 1 hora. Posteriormente, se tomó 1 ml del sobrenadante de la muestra y se mezcló con 5 ml del medio Ellinghausen-McCullough-Johnson-Harris (EMJH) (Difco®, Estados Unidos de América) combinado con 40 μg/mL de sulfametoxazol, 20 μg/ml de trimetoprim, 5 μg/ml de anfotericina B, 400 μg/ml de fosfomicina y 100 μg/ml de 5-fluorouracilo (10). Las muestras de agua y orina de los animales domésticos se filtraron con membranas de 0,22 µm y luego se inocularon 2 o 3 gotas (aproximadamente 50 µl) en 5 ml de EMJH + 5-fluorouracilo. Todas las muestras se incubaron a 27–30 °C durante 16 semanas. Cada 8 días se observaron al microscopio de campo oscuro y se realizaron subcultivos de las muestras con crecimiento de espiroquetas. Una muestra se consideró positiva cuando se obtuvo crecimiento en al menos uno de ellos.

Para efectuar el análisis mediante la MAT, se siguieron los protocolos descritos por la Organización Mundial de la Salud (9). Se utilizaron 22 muestras en 2014, 132 en 2015 y 109 en 2016. La primera fase consistió en realizar el análisis cualitativo con una dilución de suero 1:200 para identificar los posibles serogrupos. En la segunda fase, se realizó un análisis cuantitativo con diluciones seriadas de los sueros desde 1:200 hasta 1:25 600. En ambas pruebas se utilizaron como antígenos 30 cepas de referencia, distribuidas en 6 especies patógenas y 2 saprófitas, que eran representativas de 24 serogrupos. (Información disponible previa solicitud a los autores.) El Centro Nacional de Diagnóstico y Referencia (CNDR) proporcionó el panel de cepas de referencia al laboratorio de microbiología del CEVEDI de la Escuela de Ciencias Agrarias y Veterinarias de la UNAN en León.

Las espiroquetas aisladas postincubación después de 7 días se centrifugaron a 17 500 x g durante 10 min (11) y se tomaron 200 µl del precipitado para realizar la extracción del ADN siguiendo las indicaciones del kit comercial UltranClean® Blood Spin de MO BIO, Estados Unidos de América).

Para hacer la ampliación, se siguieron dos protocolos. El primero consistió en aplicar el ensayo descrito por Levett, et al. (11) con los cebadores LipL32-270F (5´-CGCTGAAATGGGAGTTCGTATGATT-3´) y LipL32-692R (5´-CCAACAGATGCAACGAAAGATCCTTT-3´), que flanquean una ampliación de 423 pb correspondiente al gen LipL32, único en las especies de leptospiras patógenas. El segundo ensayo se aplicó siguiendo el protocolo descrito por Merien, et al. (12) con los cebadores LFB1-F (5’-TAGGAAATTGCGCAGCTACA-3´) y LFB1-R (5’- GGCCCAAGTTCCTTCTAAAAG −3´), que amplifican un segmento de 331 pb en las especies patógenas.

El análisis descriptivo de los datos consistió en la estimación de las frecuencias relativas con sus respectivos intervalos de confianza de 95% (IC95%). Para comparar variables categóricas con grupos independientes, se utilizó la prueba de Chi cuadrado. Esta prueba se realizó cuando se encontró menos de 20% de las celdas en las tablas de contingencia, con frecuencias esperadas menores de 5 (fundamentalmente en los resultados de la MAT). En los casos en que no se cumplió dicho criterio, se aplicó la prueba exacta de Fisher. Para averiguar la existencia de asociaciones entre variables independientes (mes, tipo de muestra, departamento y año) con la variable dependiente aislamientos de espiroqueta (positivos o negativos) y año, especie y departamento con la variable dependiente prueba de microaglutinación (positiva o negativa), así como para controlar variables confusoras, se realizaron estratificaciones por las variables independientes y se construyó un modelo de regresión logística binaria en cada caso. Su bondad de ajuste se analizó con la prueba de Hosmer y Lemeshow.

Los procedimientos los realizaron veterinarios de la Escuela de Ciencias Agrarias y Veterinarias de la UNAN-León. En cada caso se contó con el consentimiento informado de los propietarios de los animales domésticos y las viviendas y se garantizó la confidencialidad de los datos de los pacientes antes de realizar las actividades. El muestreo en animales domésticos se hizo con la aprobación y participación del IPSA y las visitas a las viviendas de los pacientes y sus alrededores, con la aprobación y participación del MINSA como parte de la vigilancia activa de la leptospirosis en Nicaragua. Las cuatro instituciones participantes (UNAN-León, IPSA, MINSA, OPS/OMS) forman parte de la Comisión Nacional de Zoonosis, de la cual surgió la propuesta de realizar este estudio.

RESULTADOS

Se encontraron espiroquetas en 32,6% (IC95%: 27,2-37,9) de todas las muestras analizadas mediante aislamiento. El 23,2% (IC95%: 14,9-31,5) de las muestras de orina de animales domésticos, 47,3% (IC95%: 38,3-56,3) de las muestras de agua y 20,3% (IC95%:10,1-30,5) de tierra fueron positivas en el aislamiento. La estratificación de los resultados del aislamiento de las diferentes muestras por departamentos reveló que en Rivas 50% (7/14) de los animales fueron positivos, mientras que solo en 4,3% (1/23) de los animales de Matagalpa se observó crecimiento (P < 0,05). En las muestras de agua de Nueva Segovia y Rivas los porcentajes de aislamientos fueron altos, 85% (17/20) y 72,2% (13/18), respectivamente, mientras en Madriz no se obtuvieron aislamientos (0/2) (P < 0,01). En las muestras de tierra también se observaron diferencias estadísticamente significativas en los porcentajes de aislamientos entre los departamentos (P < 0,01). En Nueva Segovia y Rivas se obtuvo el porcentaje más alto de aislamientos (cuadro 1).

CUADRO 1

Estratificación de los aislamientos positivos a espiroquetas en las diferentes muestras por departamentos de Nicaragua, 2014-20161

Departamento	Animales	P2	Aguas	P2	Tierra	P2	Total de muestras
	% (número/total)		% (número/total)		% (número/total)
Chinandega	12 (3/25)	< 0,05	60 (6/10)	< 0,01	42,9 (3/7)	< 0,01	42
Jinotega	39,1 (9/23)		50 (8/16)		50 (1/2)		41
León	22,7 (5/22)		27,3 (6/22)		37,5 (3/8)		52
Madriz	…		0 (0/2)		NA		2
Matagalpa	4,3 (1/23)		26,8 (11/41)		0 (0/40)		104
Nueva Segovia	20 (1/5)		85 (17/20)		60 (3/5)		30
Rivas	50 (7/14)		72,2 (13/18)		57,1 (4/7)		39
Total de muestras	112		129		69		310

En los departamentos de Boaco, Managua y Masaya no se tomaron muestras para el aislamiento.

Valor P de la prueba exacta de Fisher.

Los porcentajes de aislamientos positivos más elevados se observaron en 2016, 51,1% (23/45) en animales domésticos, 74,1% (43/58) en muestras de agua y 58,8% (10/17) en muestras de tierra y las diferencias entre ellos fueron estadísticamente significativas (P < 0,01) (cuadro 2). En octubre se detectó la frecuencia más alta de aislamientos positivos en animales, agua y tierra: 55,2% (16/29), 77,1% (37/48) y 57,1% (8/14), respectivamente, y las diferencias entre ellos también fueron estadísticamente significativas (P < 0,01) (cuadro 3).

CUADRO 2

Aislamientos positivos a espiroquetas en las diferentes muestras por años de muestreo, Nicaragua, 2014-2016

Año	Animales	P1	Agua	P1	Tierra	P1	Total de muestras
	% (número/total)		% (número/total)		% (número/total)
2014	5,9 (1/17)	< 0,01	0 (0/8)	< 0,01	NA	< 0,01	25
2015	4 (2/50)		28,6 (18/63)		7,7 (4/52)		165
2016	51,1 (23/45)		74,1 (43/58)		58,8 (10/17)		120
Total de muestras	112		129		69		310

Valor P de la prueba exacta de Fisher.

CUADRO 3

Porcentajes de aislamientos positivos a espiroquetas en las diferentes muestras por mes, Nicaragua, 2014-2016

Mes	Animales	Agua	Tierra	P1	Total de muestras
	% (número/total)	% (número/total)	% (número/total)
Febrero	0 (0/2)	NA	NA	NA	2
Abril	0 (0/2)	NA	NA	NA	2
Junio	5,9 (1/17)	0 (0/8)	NA	≥ 0,05	25
Julio	13,0 (3/23)	NA	NA	NA	23
Septiembre	NA	0 (0/2)	NA	NA	2
Octubre	55,2 (16/29)	77,1 (37/48)	57,1 (8/14)	≥ 0,05	91
Noviembre	8,3 (3/36)	36,5 (23/63)	9,4 (5/53)	< 0,01	152
Diciembre	0 (0/3)	12,5 (1/8)	50,0 (1/2)	≥ 0,05	13
P1	< 0,01	< 0,01	< 0,01
Total de muestras	112	129	69		310

Valor P de la prueba exacta de Fisher.

NA: no aplicable.

Los porcentajes de positividad al aislamiento en muestras de agua fueron los siguientes: aguas estancadas 100% (3/3), agua de río 81,3% (13/16), agua de pozo 57,1% (16/28) y agua almacenada 40,0% (22/55) (cuadro 4). En el modelo de regresión logística las muestras de agua tuvieron mayor probabilidad de ser positivas respecto a las de tierra. En 2015, la probabilidad de encontrar muestras positivas en el aislamiento fue menor que en 2016, mientras que en 2014 esta probabilidad fue similar a la de 2016 (cuadro 5).

CUADRO 4

Aislamientos de espiroquetas según las diferentes fuentes de agua estratificados por departamento, Nicaragua, 2014-2016

Departamento	Fuente de agua1	Positivos/total de muestras	P
Chinandega	Agua almacenada	1/2	≥ 0,052
	Agua de pozo	4/5
	Río	1/2
Jinotega	Agua almacenada	5/11	≥ 0,052
	Agua de pozo	1/3
	Río	2/2
León	Agua almacenada	1/10	≥ 0,052
	Agua de pozo	2/7
	Río	2/4
Madriz	Agua almacenada	0/2
Matagalpa	Agua almacenada	5/16
Nueva Segovia	Agua almacenada	3/5	≥ 0,052
	Agua de pozo	7/8
	Río	7/7
Rivas	Agua almacenada	7/9	≥ 0,052
	Agua de pozo	2/5
	Agua estancada	3/3
	Río	1/1
Total	Agua almacenada	22/55	< 0,013
	Agua de pozo	16/28
	Agua estancada	3/3
	Río	13/16

En 27 muestras no fue posible obtener el dato del tipo de fuente de agua.

Valor P de la prueba exacta de Fisher.

Valor P de la prueba de Chi cuadrado.

CUADRO 5

Regresión logística para el aislamiento de espiroqueta, Nicaragua, 2014-2016

Variables	Categorías de las variables	Odds ratio	IC95%
			Inferior	Superior
Mes	Diciembre1
	Febrero	0
	Abril	0
	Junio	0
	Julio	0,01	0	1,95
	Septiembre	0
	Octubre	0
	Noviembre	0,82	0,04	15,38
Tipo de muestra	Tierra1
	Animales domésticos	1,5	0,53	4,28
	Agua	3,49	1,56	7,80
Departamento (región)	Rivas1
	Chinandega	0
	Jinotega	1,44	0,44	4,76
	León	0
	Madriz	0
	Matagalpa	0
	Nueva Segovia	1,08	0,37	3,18
Año	20161
	2015	0,03	0	0,31
	2014	0

Categoría de referencia.

IC95%: intervalo de confianza de 95%.

Valor P de la prueba de bondad de ajuste de Hosmer y Lemeshow = 0,397.

El 14,1% (37/263) de los animales fueron reactores en la prueba de microaglutinación. Un animal mostró reacción a dos serogrupos y uno, a tres serogrupos. El serogrupo más frecuente fue Icterohaemorrhagiae con 43,2% (16/37), seguido por Canicola 16,2% (6/37), Hebdomadis y Louisiana 13,5% (5/37), Pyrogenes 10,8% (4/37), y Pomona 8,1% (3/37). El reactor menos frecuente (2,7%) fue Sejroe (1/37). El serogrupo Icterohaemorrhagiae se encontró en todas las especies de animales de los que se obtuvieron muestras a excepción de los porcinos y no se encontró asociación entre el serogrupo y las especies (P ≥ 0,05). El serogrupo Icterohaemorrhagiae fue el más frecuente en los departamentos de Chinandega, Boaco, Masaya, Managua y Nueva Segovia, mientras que en Rivas el más frecuente fue el serogrupo Canicola (P < 0,05).

En la regresión logística para los resultados de la prueba de microaglutinación se encontró que los años y los departamentos se asociaron con el resultado positivo de la prueba, y la probabilidad de encontrar reactores en 2015 respecto a 2016 fue mayor, mientras que la probabilidad de reactores fue significativamente menor (P < 0,05) en los departamentos de Chinandega y Nueva Segovia respecto al departamento de Rivas (cuadro 6).

CUADRO 6

Regresión logística para los resultados de la prueba de microaglutinación en animales domésticos, Nicaragua, 2014-2016

Variable	Categorías de las variables	Odds ratio	IC95%
			Inferior	Superior
Año	20161
	2015	5,55	1,28	24,1
	2014	0
Especie	Porcinos1
	Bovinos	1,18	0,30	4,66
	Caninos	1,62	0,58	4,56
	Equinos	2,12	0,29	15,5
Departamento	Rivas1
	Boaco	0,24	0,04	1,52
	Chinandega	0,13	0,02	0,87
	Jinotega	0,19	0,02	1,61
	León	0
	Madriz	0,16	0,01	2,91
	Managua	0,16	0,02	1,19
	Masaya	0,20	0,03	1,33
	Matagalpa	0
	Nueva Segovia	0,21	0,05	0,95

Categoría de referencia.

IC95%: intervalo de confianza de 95%.

Valor P de la prueba de bondad de ajuste de Hosmer y Lemeshow = 0,989.

En el análisis con la PCR para identificar leptospiras de las especies patógenas, 10,2% (9/88) de los aislamientos fueron positivos a la prueba y no se encontró ninguna asociación del resultado con los departamentos (P ≥ 0,05) ni con el tipo de muestra (P ≥ 0,05).

DISCUSIÓN

Como en Nicaragua las leptospiras están ampliamente distribuidas en animales y, por consiguiente, en la tierra y en las aguas, cabe esperar altas incidencias de esta enfermedad en humanos (4). La orina de animales infectados es una fuente de transmisión directa o indirecta para los humanos, lo que se suma a que las condiciones climáticas del país facilitan la supervivencia de la espiroqueta en el ambiente (4, 7, 9). En este estudio se ha encontrado un elevado porcentaje de aislamientos de leptospiras en la orina, el agua y la tierra en zonas donde la leptospirosis es endémica, lo que podría implicar un aumento de la aparición de nuevos casos o brotes.

En términos generales, los ríos de Nicaragua y de otros países de la zona se utilizan con fines recreativos, limpieza y para consumo animal y humano (5, 16), lo que los convierte en un factor principal de infección. La elevada frecuencia de ríos contaminados se puede relacionar con el acceso de los animales a ellos, donde vierten grandes cantidades de orina que puede estar infestada con leptospiras. Otros estudios reflejan hallazgos similares de aislamientos de leptospiras en muestras de agua (14, 15).

Los departamentos incluidos en este estudio tienen un alto porcentaje de suelos del tipo cambisol y ambisol y ello facilita la retención de humedad en épocas lluviosas. Además, su pH alcalino puede contribuir a explicar la alta frecuencia de aislamientos (4). El uso del medio EMJH suplementado con sulfametoxazol, trimetoprim, anfotericina B, fosfomicina y 5-fluorouracilo pudo haber aumentado el porcentaje de espiroquetas aisladas (17). La utilización de estos antibióticos puede reducir la contaminación del medio y el sobrecrecimiento de otras bacterias diferentes de Leptospira spp.

En octubre, la época más lluviosa en el área estudiada, se encontraron los porcentajes de aislamientos positivos más altos. La humedad desempeña un papel fundamental en la transmisión de la bacteria a humanos y a animales, tanto por la vehiculización mecánica del agente desde especies reservorios, como por la maceración de la piel en las especies susceptibles, con la consiguiente entrada de la espiroqueta en el organismo (18–20). Estos resultados son congruentes con los obtenidos en estudios anteriores realizados en Nicaragua en los cuales se demostró una asociación entre la aparición de casos de leptospirosis y los meses con más precipitaciones (5, 21).

En este trabajo se pone de manifiesto una frecuencia de aislamientos significativamente mayor en muestras de ríos que en las de aguas estancadas. Sin embargo, en todas las fuentes de agua se encontró una elevada positividad a pesar de que otros estudios indican que el aislamiento de leptospiras a partir de muestras de aguas es difícil por la presencia otros agentes que pueden disminuir la sensibilidad de la técnica. Así se sugiere en un estudio que atribuyó la ausencia de aislamientos positivos en muestras de aguas estancadas a la presencia de otras bacterias menos exigentes para su crecimiento (22). Cabe mencionar que no se observaron diferencias significativas en la frecuencia del aislamiento entre las diferentes fuentes de agua cuando se estratificaron por departamentos, lo que puede estar influido por el bajo número de muestras analizadas en cada estrato (departamento).

En otros estudios se ha descrito la asociación de serogrupos con una especie animal en particular (21, 23), aunque esto no se ha observado en el presente trabajo. Este hecho podría estar enmascarado por la presencia de animales reactores a más de un serogrupo, como se ha descrito en otro estudio, en el cual se afirma que la posibilidad de coinfección con múltiples serovares es un factor que altera los resultados de la MAT en áreas de alta endemicidad (24). El serogrupo más frecuente, que se encontró en la mayoría de las especies de animales, fue Icterohaemorrhagiae. En Nicaragua se habían descrito resultados similares entre 2007 y 2013, lo que constituye una información que podría ser útil para diseñar e implantar programas de vacunación (21).

Los resultados de la regresión logística revelaron que una serología positiva se asocia con el año y los departamentos. En Rivas se estimó una probabilidad de obtener un resultado positivo más alta respecto a los departamentos de Chinandega y Nueva Segovia, lo que a su vez coincide con que Rivas fue uno de los departamentos con mayor incidencia acumulada de leptospirosis en humanos en 2016 (4,29/10 000 habitantes, datos no publicados). Históricamente, los departamentos de León y Chinandega han presentado una alta incidencia de casos en humanos, si bien en los últimos años la leptospirosis ha aumentado en otros departamentos. Estos hechos traducen cambios en el comportamiento epidemiológico de la enfermedad.

El aumento anual observado en la positividad también se asocia con el ascenso del número de casos en humanos. Este hallazgo resalta la necesidad de seguir sumando esfuerzos en el control de la enfermedad, ya que como se plantea en otro estudio (21), en 2013 se presentaron pocos casos en humanos, aunque en él se observó un aumento de la frecuencia de animales positivos a la prueba de microaglutinación acompañado de un ascenso del número de casos en humanos.

En 2016, se obtuvo un mayor número aislamientos que puede estar asociado, entre otros factores, con el aumento de precipitaciones pluviales comprobado respecto a 2014 y a 2015 (25). Por otro lado, las mejoras en las capacidades diagnósticas de los laboratorios (26, 27), así como una mayor experiencia en el abordaje integral de los casos en humanos, pueden haber contribuido a una mejor captación de casos.

Los resultados de la PCR reflejan la presencia de leptospiras de las especies patógenas en el ambiente, principalmente en ríos, lo que podría estar relacionado con la aparición de casos en humanos que fueron registrados por el Ministerio de Salud (4 593 casos en el período estudiado, datos no publicados). No obstante, el número de estos casos es bajo si se tiene en cuenta que estos ríos son utilizados de forma frecuente por los habitantes. Todo ello indica que en estas áreas se pueden producir infecciones, en su mayoría asintomáticas, tal como se refleja en un estudio realizado en el municipio de El Sauce, una zona hiperendémica donde se encontró una alta frecuencia de personas asintomáticas con títulos elevados de anticuerpos frente a Leptospira spp. (16). En este estudio, la PCR se aplicó a muestras con crecimiento de espiroquetas. En esta prueba un resultado negativo no debe considerarse como saprófita, ya que se ha demostrado que el ADN extraído puede contener inhibidores de la reacción que produzcan resultados negativos falsos (28).

Como limitación de este estudio cabe destacar que no se pudo realizar un muestreo probabilístico, ya que solo se extrajeron en áreas peridomésticas de los casos de leptospirosis humana. Por este motivo, los resultados no se pueden extrapolar al resto de la población.

En conclusión, esta investigación permite confirmar que la leptospirosis es endémica en Nicaragua. Los animales domésticos, las aguas ambientales y la tierra actúan como factores de riesgo en los brotes de la enfermedad. Estos factores deben tenerse en cuenta cuando se desarrollen planes estratégicos de prevención y control de la leptospirosis en humanos.