[Analysis of the gene in a hereditary coagulation factor Ⅶ deficiency pedigree].

遗传性凝血因子Ⅶ（FⅦ）缺乏症是一种临床上较少见的常染色体隐性遗传性出血性疾病，多半与FⅦ基因缺陷有关，男女均可发病。Alexander等[1]在1951年首次报道此病，约18%的患者其双亲有血缘关系发病率为1/300 000~1/500 000[2]–[3]。近期，我们确诊一例遗传性FⅦ缺乏症患者，现将家系资料及基因分析结果报告如下。

病例资料

一、家系资料

先证者，女，16岁，因间断齿龈出血（可自行停止）4年入院。无使用抗凝剂、服用灭鼠药物等病史。父母为非近亲结婚，有一弟弟，均健在，无出血史。患者于2015年8月19日月经初潮，月经量过多。入院查体：生命体征平稳，皮肤黏膜稍苍白，贫血貌，心肺腹未见明显阳性体征。入院后辅助检查：血常规：WBC 6.14×109/L，RBC 2.44×1012/L，HGB 67 g/L，PLT 215×109/L。凝血项目：PT 30.6 s（正常参考值11.0~14.5 s），凝血酶原活动度（PTA）26.1%（正常参考值70.0%~130.0%），APTT 29.3 s（正常参考值28.0~44.0 s），纤维蛋白原（Fib）3.54 g/L（正常参考值1.80~4.00 g/L）。凝血因子及纠正试验：纠正前PT 35.8 s，纠正后为12.4 s。自身抗体谱、输血前检查、妇科B超、肝肾功能正常。凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅹ活性等均正常，FⅦ活性6.9%（正常参考值50.0%~120.0%）；凝血因子Ⅷ抑制物定量0。临床诊断：遗传性FⅦ缺乏症。家系图见图1。家系成员凝血功能检查见表1。

图1

遗传性凝血因子Ⅶ缺乏症家系图

表1

遗传性凝血因子Ⅶ缺乏症家系成员凝血功能检测结果

成员	PT（s）	PT-RATIO	PTA（%）	TT（s）	Fib（g/L）	APTT（s）	FⅧ∶C（%）	FⅨ∶C（%）	FⅪ∶C（%）	FⅡ∶C（%）	FⅦ∶C（%）	FⅩ∶C（%）
Ⅲ1a	30.6	2.71	22	16.6	3.54	29.3	176.8	107.5	67.0	92.4	6.9	80.5
Ⅱ2	13.7	1.03	94	16.1	3.24	34.3	131.0	88.3	103.1	111.3	55.8	100.0
Ⅱ1	13.7	1.03	94	17.5	2.84	32.7	125.5	99.0	138.9	96.7	49.8	91.5
Ⅲ2	12.2	0.92	100	17.0	2.81	37.8	/	/	/	/	/	/
Ⅰ2	14.4	1.08	85	16.8	3.74	37.4	/	/	/	/	/	/
Ⅰ3	12.6	0.95	100	17.1	2.92	34.6	/	/	/	/	/	/
参考值	11.0～14.5	0.80～1.20	70～130	14.0～21.0	1.80～4.00	28.0～44.0	70.0～150.0	70.0～120.0	70.0～150.0	70.0～120.0	50.0～120.0	70.0～120.0

注：PT：凝血酶原时间；PT-RATIO：凝血酶原时间比率；PTA：凝血酶原时间活动度；TT：凝血酶时间；Fib：纤维蛋白原；FⅧ∶C、FⅨ∶C、FⅪ∶ C、FⅡ∶C、FⅦ∶C、FⅩ∶C分别为凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅱ、Ⅶ、Ⅹ活性；/：未测。a：先证者

二、基因检测结果

先证者FⅦ基因催化区9号外显子检出C>G（Tyr417stop）、G>A（Trp424stop）2个杂合突变，分别使得417位点酪氨酸（Tyr）突变为终止密码子和424位点的色氨酸（Trp）突变为终止密码子（图2）。其父母和祖母在9号外显子处分别有一处杂合突变，且先证者的突变与其父母相同，其祖母突变与其父亲相同，而先证者弟弟和外祖父未检出9号外显子基因突变。

图2

先证者凝血因子Ⅶ（FⅦ）基因9号外显子测序图

A：先证者F Ⅶ基因9号外显子C>G（Tyr417stop）和G>A（Trp424stop）杂合突变；B：野生型

讨论

FⅦ基因位于13号染色体长臂（13q34），长度为12 850 bp，由9个外显子及8个内含子组成[4]。催化区包括激活区和蛋白酶区，激活区是FⅦ被激活的部位，而蛋白酶区是识别并裂解底物（FⅨ、FⅩ、FⅦ）的部位，催化区的组氨酸-193、天门冬氨酸-242和丝氨酸-344组成丝氨酸蛋白酶所特有酶活性中心，是维护FⅦ功能和结构的重要部分[5]。人类基因突变数据库公布的FⅦ基因突变有600多种（http://www.umd.be/F7/W_F7/index.html），点突变约占80%[6]。FⅦ缺乏症的基因突变与临床表型无明显相关性，但纯合和复合杂合型的基因突变临床出血常较严重，单一杂合性突变一般无临床症状，某些多态性可降低FⅦ水平，引起患者临床出血症状加重[7]。

本家系先证者FⅦ基因9号外显子Tyr417Stop和Trp424Stop两个杂合突变使得患者表现出遗传性FⅦ缺乏症的相关症状，先证者表现为4年前间断齿龈出血和月经量过多，输注新鲜冰冻血浆可以纠正凝血异常。先证者凝血功能检查主要表现为PT明显延长，FⅦ活性仅为6.9%。而其父母和祖母只携带有1个杂合突变且无出血表现，PT、INR、PTR、PTA、TT、Fib、APTT等凝血指标均正常。其双亲FⅦ活性低于正常值（49.8%、55.8%）。先证者弟弟和外公未发现基因突变，凝血功能和凝血因子活性正常。

在完成家系所有成员的FⅦ基因外显子和侧翼区测序后发现本家系中先证者FⅦ基因催化区9号外显子出现2处杂合突变，分别为C>G（Tyr417stop）和G>A（Trp424stop），分别使得417位点酪氨酸（Tyr）突变为终止密码子和424位点的色氨酸（Trp）突变为终止密码子。其父母和祖母在9号外显子处分别有一处基因发生杂合突变，且先证者的突变与其父母相同，其祖母的突变与其父亲相同，而先证者弟弟和外公均未发现9号外显子基因突变，这符合常染色体隐性遗传规律。由于FⅦ基因的9号外显子编码催化区结构域，所以终止密码子突变可使多肽链比正常缩短，导致所构成的FⅦ蛋白结构及功能发生改变，以致先证者出现明显出血表现。先证者双亲及其祖母均为FⅦ基因发生1个点突变却没出血症状，其FⅦ活性减低可能与所编码的蛋白结构功能改变不明显或者未影响其FⅦ蛋白质功能有关，这与文献报道的杂合子基因突变可以不出现出血症状相一致。

本研究发现的FⅦ基因Tyr417Stop突变目前国内外均未见相关报道，在中国汉族人为新发现的突变位点，此位点G>A突变在巴西人FⅦ基因突变导致的遗传性FⅦ缺乏症已有报道[8]。而FⅦ基因Trp424Stop突变为国外已报道过的突变，国内属于首例报道。